Эмбриологический протокол

Эмбриологический протокол

Оплодотворение методом ЭКО

Данная оценка осуществляется эмбриологом визуально. В этом случае нельзя со полной уверенность судить о зрелости ооцитов, так как для такого оплодотворения ооциты не очищаются от клеток кумулюса. Если ОКК выглядит плотным и темным, то он оценивается эмбриологом как «0». Если ОКК выглядит рыхлым и прозрачным, то он, как правило, содержит зрелый ооцит и получает оценку «1». Если на следующий день, после очистки ооцитов от клеток кумулюса и проверки оплодотворения, данный ооцит действительно был зрелым, то оценка выглядит как «1–1», если ооцит оказался не зрелым, то оценка будет «1–0».

Оплодотворение методом ИКСИ

Данная оценка проводится через час после получения ОКК, которые обрабатываются ферментом, чтобы отделить ооциты от лишних клеток. В этом случае эмбриолог с уверенностью может говорить о количестве зрелых (пригодных для оплодотворения) ооцитов.

• Столбец 0 — это день пункции (день ноль).
• ООК — означает ооцит‐кумулюсный комплекс.
• MII — Зрелый ооцит
• MI, GV — Не зрелые ооциты (для оплодотворения не подходят, ооциты стадии MI могут дозреть в чашке, но зиготы, полученные после такого оплодотворения, как правило, не дают хороших эмбрионов)
• ABN — абнормальный ооцит (для оплодотворения не подходит. Может быть без оболочки, иметь включения в цитоплазме, неправильную форму и т.д. Может быть как зрелым так и не зрелым)
• ATR — атретичный (дегенеративный) ооцит (для оплодотворения не подходит)

Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения

Эмбриолог следит за действием буквально по часам, т.к возможны разные аномальные варианты развития, которые в клинике обязательно отслеживают и культивируют отдельно. Через 16–18 часов после проведения оплодотворения в ооците появятся специфические округлые структуры — пронуклеусы. Это предшественники ядер, содержащие генетический набор как мамы, так и папы.

Ооциты (NF, 1PN) откладываются в отдельныю капли и за ними также наблюдают. Если из такого ооцита получается отличный эмбрион, то вопрос о его переносе или заморозки решается совместное с репродуктологом, эмбриологом и пациентом.

Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение 6 дней.

• 2PN — два пронуклеуса (нормальное оплодотворение). Именно такие эмбрионы культивируют дальше
• NF – пронуклеусов нет. Оплодотворение либо наступило, но пронуклеусы слишком быстро исчезли, либо ооцит просто не оплодотворился
• 1PN — один пронуклеус. В 25% случаев при 1PN эмбрион может быть диплоидным.
• NS — ооцит не выжил после процедуры ИКСИ
• 3PN и более — аномальный эмбрион. Перенос такого эмбриона запрещен, в клинике такие эмбрионы никогда не используют.

Одноступенчатые среды

Для культивирования эмбрионов в клинике используются передовые одноступенчатые среды, которые позволяют «оставить в покое» эмбрионы до 5го дня развития.

Через сутки эмбрион уже состоит из 6–8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Однако если «генетическая программа», в которой закодированы этапы нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион (4–19% случаев) останавливается в развитии не достигнув стадии бластоцисты — так называемый «блок развития». Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов.

Наиболее точная (эффективная) оценка эмбрионов происходит на стадии бластоцисты (5–6 день после оплодотворения). И если «лучшая» бластоциста выросла из «худшего» ооцита, максимальные шансы на успешное ЭКО будут все‐таки у нее. Поэтому, уважаемые пациенты, не стоит узнавать ежедневно судьбу каждого эмбриончика. Наберитесь терпения, скоро все станет предельно ясно!

Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где первая цифра означает количество бластомеров, буква их качество, а вторая цифра оценка фрагментации.

• Тип A1 — эмбрион с равными бластомерами, отличного качества без ануклеарных (безъядерных) фрагментов (например, 4А1 — четырех клеточный «отличник»).
• Тип В2 — эмбрион хорошего качества с содержанием ануклеарных фрагментов до 20% (4В2)
• Тип С — эмбрион удовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов от 21% до 50% (4С3)
• Тип D — эмбрион неудовлетворительного качества с содержанием ануклеарных фрагментов более 50% (4D4)

Классификация бластоцит

Столбец 5, 6 — день переноса и/или криоконсервации (день 5 и 6).

При классификации бластоцист в обозначении указывают цифру от 1 до 6 (степень развития эмбриона):

1. полость бластоцисты меньше, чем половина целого эмбриона
2. полость бластоцисты больше, чем половина целого эмбриона
3. полная бластоциста, полость заполняет почти весь эмбрион
4. развитая бластоциста, полость включает весь эмбрион, тонкая оболочка
5. бластоциста пробивается из оболочки
6. бластоциста без оболочки

Буквенное обозначение

Качество внутриклеточной массы, из которой будет развиваться зародыш:

• A — много клеток, плотно упакованные
• B — несколько клеток, свободно сгруппированные
• C — очень немного клеток

Качество трофэктодермы (TE), которая обеспечит прикрепление эмбриона к эндометрию и разовьется в плаценту

• A — много клеток, образуют единый слой
• B — мало клеток, образуют свободный эпителий
• C — очень мало крупных клеток