Оставить заявку
У вас остались вопросы?
Наша клиника готова ответить на все интересующие вас темы, и поддержать в трудные минуты. Просто оставьте заявку, и мы свяжемся с вами для обсуждения всех деталей.
Оценка ооцитов и эмбрионов в лаборатории Эмбрилайф
Расшифровка эмбриологического протокола
Эмбриологический протокол – это запись всех этапов работы с ооцитами, сперматозоидами и эмбрионами в процессе культивирования с 0 дня (день оплодотворения) до 5-7 дня развития (момента криоконсервации или переноса). В нем отражается метод оплодотворения, качество гамет (ооцитов, сперматозоидов) и эмбрионов.
Современные культуральные среды позволяют находиться эмбрионам всё время в лаборатории в одной среде. Это позволяет как можно реже «тревожить» эмбрионы, и большую часть времени они находятся в стабильных благоприятных условиях. Эмбриолог, как правило, оценивает развитие эмбрионов на день 1 (оплодотворение) и день 5 и 6,7. В некоторых случаях, требуется оценка на 2,3,4 день.
Оценка эмбриона проводится по определенным алгоритмам и включает в себя оценку количества клеток, их форму и качество. Эмбрионы могут развиваться по-разному: часть из них может остановиться на ранних стадиях, часть отставать в развитии.
На пятый день развития эмбрионы достигают стадии бластоцисты. У эмбриона к этому моменту формируется полость, количество клеток около 100, клетки дифференцируются на два типа. Оценка производится с использованием классификации, предложенной Дэвидом Гарднером и соавторами: с помощью цифровых и буквенных обозначений описываются размер полости, клетки внутренней клеточной массы (ВКМ), клетки трофэктодермы.
Первая цифра (1-6) обозначает размер полости бластоцисты. За цифрой следует первая буква (A-C). Она обозначает качество клеток внутренней клеточной массы: А - клеток много, они плотно упакованы, С - клеток мало или нет совсем.
Последняя буква описывает качество трофэктодермы: А - клеток много, они плотно прилегают друг к другу, С - в трофэктодерме несколько вытянутых клеток.
Таким образом, эмбрион лучшего качества будет обозначаться как BL3AA, BL4AA и т.д. , хорошего качества, например, BL3BB,BL5BB, а низкого качества BL3CC, BL4BC.
Эмбрионы хорошего и отличного качества имеют больший потенциал к имплантации, однако это не значит, что у бластоцисты низкого качества совсем нет шансов. Для переноса в первую очередь всегда выбирается эмбрион лучшего качества, но, если у пациентки только одна бластоциста BL3BC, например, ее тоже можно перенести. Эмбриолог видит больше: он пользуется микроскопом и своим опытом, а цифрами и буквами не всегда можно все описать. Для криоконсервации отбирают эмбрионы только хорошего качества. Для проведения биопсии трофэктодермы - эмбрионы хорошего качества с размером полости ≥3.
В ходе стимуляции суперовуляции фолликулы созревают с разной скоростью, поэтому часть полученных ооцитов может быть незрелыми. Кроме того, некоторые ооциты могут быть абнормальными. В среднем 80-90% ооцитов «готовы» к оплодотворению. Эффективность методов оплодотворения ЭКО или ИКСИ не достигает 100%, и это чаще всего зависит от качества сперматозоидов и ооцитов. Кроме того, качество гамет (сперматозоидов и ооцитов), как правило, оказывает влияние и на дальнейшее развитие эмбрионов. Поэтому количество полученных ооцитов на пункции фолликулов не равно количеству качественных эмбрионов к 5/6 дню развития.
День | Обозначение | Расшифровка | Комментарии |
ДЕНЬ 0 Оплодотворение методом ИКСИ | MII | Зрелый ооцит | Оценка качества ооцита производится перед проведением оплодотворения методом ИКСИ: ооциты для этого очищают от окружающих клеток кумулюса. ИКСИ проводят только зрелым ооцитам.
|
MI | Незрелый ооцит | ||
GV | Незрелый ооцит на стадии зародышевого пузырька | ||
Abn | Абнормальный ооцит (ненормальный) | ||
Atr | Атрезивный ооцит (состояние дегенерации) | ||
ДЕНЬ 0 Оплодотворение методом ЭКО
| 1 | Клетки кумулюса рыхлые | Оценка ооцит-кумулюсного комплекса (ОКК) - приблизительная оценка – качество и зрелость ооцита можно оценить только на следующий день после оплодтоворения |
0 | Клетки кумулюса плотно прилегают к ооциту, темные | ||
Atr | Атрезивный – оценка ОКК, полученного в дегенеративном состоянии | ||
| |||
ДЕНЬ 1
Оплодотворение методом
ИКСИ
| 2 PN | Зигота с 2 пронуклеусами – нормальное оплодотворение | Оценка оплодотворения. У нормально оплодотворившихся ооцитов видно два пронуклеуса (2PN), эта стадия называется зигота. Не все ооциты оплодотворяются правильно, и в таких случаях наблюдают один или три и более пронуклеуса; часть ооцитов может совсем не оплодотвориться. |
0 PN | Пронуклеусы не видны | ||
1 PN | Зигота с 1 пронуклеусом | ||
≥3 PN | Зигота с 3 и более пронуклеусами | ||
Deg | Дегенеративный ооцит | ||
| |||
ДЕНЬ 1
Оплодотворение методом
ЭКО | 2 PN | Зигота с 2 пронуклеусами | Оценка оплодотворения. У нормально оплодотворившихся ооцитов видно два пронуклеуса (2PN), эта стадия называется зигота. Не все ооциты оплодотворяются правильно, и в таких случаях наблюдают один или три и более пронуклеуса; часть ооцитов может совсем не оплодотвориться. |
0 PN | Пронуклеусы не видны | ||
1 PN | Зигота с 1 пронуклеусом | ||
≥3 PN | Зигота с 3 и более пронуклеусами | ||
MI | Незрелый ооцит | При проведении оплодотворения методом ЭКО оценку ооцитов можно провести только на день 1. Если ооцит незрелый, то оплодотворение произойти не может. | |
GV | Незрелый ооцит | ||
Abn | Абнормальный ооцит | ||
| |||
ДЕНЬ 2-3
| 2-12 | Арабские цифры = количество бластомеров | Оценка дробления.
Уже к вечеру первого дня развития начинается дробление (деление): из одной клетки сначала получаются две клетки, затем четыре. Как правило, на второй день у эмбриона есть 4 клетки (бластомера). На третий день у эмбриона количество клеток увеличивается до 8. Оценивается количество бластомеров, их размер и наличие фрагментации.
|
Латинские буквы A-D | A – фрагментация менее 10% (эмбрион хорошего качества) B – фрагментация 10-25% (эмбрион хорошего качества) C – фрагментация 25-50% (эмбрион низкого качества) D - фрагментация ›50% % (эмбрион низкого качества) | ||
p.comp. | Частичная компактизация дробящегося эмбриона | Количество клеток увеличивается до 16 и более, часть клеток сливается | |
| |||
ДЕНЬ 4
| p.comp. | Частичная компактизация дробящегося эмбриона | К четвертому дню количество клеток достигает 16-32 и более. Часть клеток сливается, происходит компактизация. Стадия называется морула (М). По степени компактизации производят оценку (от М1 до М4) |
M1 | ‹ 50% бластомеров компактизованы, | ||
M2 | 50-70% бластомеров компактизованы, | ||
M3 | Не менее 75% бластомеров компактизованы | ||
M4 | Все бластомеры участвуют в компактизации | ||
Также эмбрион может отставать в развитии и иметь от 2 до 12 клеток. Или в эмбрионе постепенно формируется полость, и он становится бластоцистой (см. 5 день развития). | |||
Z | Зигота | Остановка в развитии на стадии зиготы | |
| |||
ДЕНЬ 5, 6, 7
|
|
|
|
BL1 А, B, C, D | Морула с ярко выраженной полостью, но невозможно оценить ТЭ и ВКМ | А, B - эмбрион хорошего качества C, D - эмбрион низкого качества | |
BL2 А, B, C, D | Бластоциста, полость которой занимает ½ или более объема эмбриона | А, B - эмбрион хорошего качества C, D - эмбрион низкого качества | |
BL3AA, BB, CC | 3 – полная бластоциста, полость заполняет эмбрион полностью, но блестящая оболочка не истончена |
| |
BL4AA, BB, CC | 4 – экспандированная бластоциста, полость заполняет эмбрион полностью, блестящая оболочка истончена
| ||
BL5AA, BB, CC | 5 – вылупляющаяся бластоциста
| ||
BL6AA, BB, CC | 6 – вылупившаяся бластоциста | ||
Z | Зигота | Остановка в развитии на стадии зиготы | |
Deg | Дегенерация клеток дробящегося эмбриона |
| |
Stop | Остановка в развитии на стадии дробления и морулы |
| |
| |||
